IVT-GFP编码绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein，简称GFP)，是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质，从蓝光到紫外线都能使其激发，发出绿色荧光。在细胞生物学与分子生物学中，绿色荧光蛋白(GFP)基因常用做报告基因(reporter gene)。GFP的激发光波长激发光波长：通常为488 nm； 发射光波长：通常为510 nm。
【基本信息】
货号 | GC |
规格 | W：0.2 mg；c：2500 ng/uL |
储存条件 | -80 ℃保存，有效期1年，不可长时间室温放置。 |
本mRNA具有以下特点：
1.采用Cap 1型帽子结构，且加帽效率高；
2.尿苷（Uridine）在序列中100%被N1-甲基假尿苷（m¹Ψ）替代，以提高蛋白表达水平并降低先天免疫应答；
使用本公司独立设计的UTR序列，进一步优化翻译效率；
3.3′端含使用本公司独立设计的polyA序列，翻译效率高于体内天然存在的polyA。
该构建体可产生强而稳定的荧光信号，非常适用于：转染条件优化、体内分布（biodistribution）研究，以及脂质纳米颗粒（LNP）递送系统的功能验证。
【试剂盒内容】
试剂 | 体积 | 个数 |
IVT-GFP | 100uL | 1支 |
【CDS序列】ATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCAAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTGCGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACCACAGCTTCGTGGTGGACAACCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCCCGCGCTCAGTCGTCCAATTCTGCCGTGGACGGCACCGCCGGACCCGGCTCCACCGGATCTCGCTGA
【产品属性】
包装形式 | 液体 |
浓度（w） | 2500 ng/uL |
全长 | 958 nt |
全长摩尔质量 | 308166.62 |
浓度（M） | 8.122 pM/uL |
储存溶液 | 1mM柠檬酸钠，pH=6.5 |
储存条件 | -20°C短时间储存，储存时长不超过2个月；-80°C长期储存 |
【质控参数】
外观 | 无色透明状液体，干净透亮，无沉淀 |
RNA长度 | 检测结果与预期相符 |
RNA含量 | ≥99.5% |
完整性 | ≥80% |
OD260/280 | 2.10-2.40 |
加帽率 | ≥95% |
内毒素 | < 10 EU/mg |
pH | 6.5±0.5 |
蛋白残留 | ≤0.5% |
常见问题及解决办法
问题 | 解决问题的方法 |
该使用多少量转染细胞？ | 以293T为例，48孔板长满后加入20-25pM的IVT-GFP，12h后即观察到绿色荧光。
|
可以用来作为RT-qPCR的样本处理吗？ | 可以，IVT-GFP可作为RNA样本正常进行RT-qPCR。 |
为什么转染细胞无荧光？ | 1. 确定细胞处于正常的生长状态，细胞无污染； 2. 转染试剂适用于RNA转染，有些转染试剂只适用于DNA转染则无法转染IVT-GFP。 |
为什么同一管IVT-GFP在不同细胞里表达差异很大？ | 1. 细胞的eIF4E水平直接决定帽依赖翻译起始效率，有些细胞eIF4E水平水平较低； 2. 细胞的RNase L的水平不同，特别是原代细胞，RNase L水平非常高，需添加RNase抑制剂 |
