IVT-mRNA（In Vitro Transcription mRNA）即在体外遵循中心法则合成的信使RNA。IVT-mRNA包含体内成熟mRNA的cap结构，5’UTR区，3’UTR区和polyA尾结构。

       将IVT-mRNA递送至细胞内能够被核糖体翻译成为蛋白质。以人的mRNA疫苗为例，翻译后的抗原蛋白可以通过多种方式刺激免疫系统，激起人体内的细胞免疫和体液免疫；又如携带某种基因的IVT-mRNA提送至培养的细胞内，可引起该基因编码的蛋白质过表达现象等。
1.IVT-mRNA制备流程
       设计体外转录模板质粒 → 转录模板质粒扩增 → 酶切线性化质粒 → 体外转录 → DNase I 处理消除模板DNA

       设计转录模板质粒需要对mRNA的5’UTR区，3’UTR区和polyA尾进行单独的优化设计，帮助模板更高效地转录和减少UTR区的通读，转录模板线性化需要使用Type IIs 型单酶切位点。IVT-mRNA使用共转录加帽可以在转录过程中将cap结构添加到mRNA的第一个核苷酸上。
2.IVT-mRNA服务介绍
       基恩科(Genecarer)生物可以帮助客户可为针对不同品种匹配合适的UTR序列。
       基恩科(Genecarer)生物设计的IVT-mRNA规避了5’UTR区中出现影响下游CDS翻译的uORF，G-四联体，发卡结构以及高度结构化的IRES等调控元件，以确保目的基因的高效表达。对目的基因CDS序列进行密码子优化，使得目的基因更加适应相应转导细胞的表达系统。3’UTR区优化减少基因通读，减少潜在的micRNA的root sequence，提高mRNA的稳定性。 另外，还配置多种备选的修饰核苷酸，有效降低mRNA在人体中的不良免疫反应。
3.质量控制介绍
3.1IVT-mRNA的产量和纯度
       每1ug反转录模板可制备高达90 ug以上的未加帽mRNA。吸附柱纯化后的RNA浓度通过测量260 nm的紫外线(UV)光吸光度来确定。RNA溶液可在NanoDrop分光光度计上直接读取。
3.2IVT-mRNA完整性
       使用变性聚丙烯酰胺凝胶和变性琼脂糖凝胶电泳，以确保转录的长度、完整性和数量。
3.3杂质检测
       蛋白残留、质粒模板残留、dsRNA等。
4.我们的优势
A.一体化生产流程，周期更短；
B.专业的技术团队和优化平台，高品质IVT-mRNA产品满足不同应用场景和客户需求；
C.现货及定制IVT-mRNA服务，满足您的科研需求。
5.IVT-mRNA制备
       以eGFP IVT-mRNA 制备为例。
       （1）含有eGFP CDS序列的共转录模板质粒构建，同时设计和优化5’UTR区，3’UTR区和polyA尾，模板质粒具有表达eGFP的完整ORF。转录模板下游设计Type IIs 型单酶切位点。转录模板含有T7启动子。
       （2）DNA模板酶切后回收纯化，好的转录效果需要高纯度的DNA模板。

       （3）将线性化好的质粒模板加入T7 RNA Polymerase体系进行体外转录，共转录加帽需加入相应的帽子类似物（上图以cap AG 为例）。
       （4）转录完成的IVT-mRNA可通过LiCl沉淀法、苯酚:氯仿提取和吸附柱进行纯化，得到的RNA溶液进行DNase I进行模板消除，得到最终产品。
6.IVT-mRNA转导细胞或注射动物
7.IVT-mRNA现货产品