脂质体 (Liposome) 是由脂质分子组成的囊泡结构，其脂质双分子层形成疏水外壳和内部的水相空腔，兼具亲水和疏水特性。脂质纳米粒（Lipid Nanoparticle，LNP）是使用脂质形成纳米微粒的一种。

mRNA是带有负电荷的长链核苷酸序列，而细胞膜表面也带有负电荷，静电排斥使得mRNA分子很难穿过细胞膜进入细胞内。并且，因为mRNA分子是单链结构，本身极易被体内的多种酶迅速降解。需要保护性外壳才能进入细胞。因为细胞膜主要由脂质组成，利用LNP包封RNA可通过细胞膜并将RNA释放到细胞质中。永久性阳离子脂质组成的LNP由于能与带负电的细胞膜发生静电作用而引起细胞毒性，因此能够在体内酸性环境转变为带正电荷的LNP是现在的主流趋势。包封mRNA的LNP与细胞膜具有良好的相融性，无免疫原性，可将其高效地递送至细胞内。

       装载mRNA的LNP除了含有带负电荷的mRNA外，另有四种成分：可电离的阳离子磷脂（ionizable lipids），中性辅助磷脂（Phospholipid），胆固醇（Cholesterol），聚乙二醇修饰的磷脂（PEG-lipid）。

一、LNP制备流程

1、配制脂质乙醇溶液

       2、计算需包封mRNA或DNA质量
       3、配置mRNA-柠檬酸缓冲液
       使用超纯水分别配制100mM的一水合柠檬酸和二水合柠檬酸钠各50ml；
       取33.0ml柠檬酸溶液和17ml二水合柠檬酸钠溶液混合。
       4、微流控混合
       使用本公司先进的微流控LNP制备平台进行LNP包封。
       5、透析储存
       6、质控检测
       使用动态光散射仪，酶标仪对LNP粒径、均一度和包封率进行QC检测。
      7、成品出库
 

二、LNP服务介绍
       基恩科(Genecarer)生物根据客户的科研需求，封装所需mRNA和DNA。

       基恩科(Genecarer)生物拥有国内一流水平的LNP封装平台，制备的LNP具有粒径单一，单分散度高度可控，批次间良好的重现性，包封率高的优点。
       基恩科(Genecarer)生物提供给客户的LNP产品毒性低，免疫原性低，对细胞几乎无损伤，并可实现＞95%的转染效率。
 

三、质量控制介绍
       1、粒径与均一度
       使用动态光散射仪测定。

2、包封率测定
       使用Quant-iTTMRiboGreen®RNA试剂进行包封率测定。Quant-iTTMRiboGreen®RNA无法穿过LNP膜，只能与膜外游离的核酸结合。使用1%triton-100X对产品进行破乳，破乳后LNP包封的RNA得以释放，可结合Quant-iTTMRiboGreen®RNA。通过计算破乳前后核酸定量差值与破乳后核酸总量的比，则可计算出包封率。
      3、细胞转染率
       以293T为例，使用包封eGFP mRNA的LNP对细胞进行转染。
       24孔板细胞铺板，过夜孵育。
       取eGFP-mRNA LNP（50ug/ml），用MEM培养基稀释至2.5ug/ml。加入铺好的细胞孔板中，孵育4/6/8/12/24/48小时后，使用荧光显微镜观察绿色荧光表达。

四、我们的优势
       A.现货LNP产品，即定即发，最大限度节省您宝贵的科研时间
       B.国内一流的LNP微流控包封平台，为您提供高质量LNP产品
       C.IVT-mRNA和LNP平台一体化服务，满足您的科研需求
 

五、LNP转导细胞、注射动物

包封eGFP mRNA 的LNP转染细胞后，＞80%的转染效率 

包封Luciferase mRNA 的LNP注射小鼠后，活体成像：

六、LNP现货产品的举例