Genecarer RT SuperMix with dsDNase是将RNA逆转录成为cDNA更为简便的操作系统,含有第一链cDNA合成所需的所有试剂,只需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应。合成的第一链cDNA可广泛用于文库构建、第二链合成、杂交、PCR扩增、RT-qPCR检测等。试剂盒中包含新一代的逆转录酶和优化的缓冲液,与普通逆转录酶系统相比,具有逆转录能力强(合成较多全长cDNA)、无RNase H活性、热稳定性高和半衰期长等优点。该逆转录酶产物得率更高,获得的cDNA片段更长,模板使用范围更广等特点。5×Reaction Mix包含逆转录反应所需的缓冲液,dNTPs及优化的逆转录引物,Supreme Enzyme Mix包含ExonScript Reverse Transcriptase,Ribonuclease Inhibitor和dsDNase,以简化加样步骤。试剂盒中含有的新型dsDNase,能够特异性去除双链DNA,而不消化RNA样品、逆转录引物及合成的cDNA,并且具 有热敏感性,可在55℃快速不可逆失活,实现去除基因组污染与逆转录反应的同步进行。


【产品特点】
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1.高热稳定性,反应温度42-55℃,有助于RNA二级结构打开;
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2.逆转录能力强、cDNA合成得率高,片段更长;
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3.无RNase H活性,避免第一链cDNA合成过程中DNA/RNA杂交体中模板RNA被降解,从而保证第一链cDNA合成量和长度;
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4.去除基因组DNA,保证定量结果更加准确;
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5.操作简便,仅需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应合成片段≤15 kb。
【适用范围】
cDNA合成及文库构建、PCR扩增
、RT-qPCR检测
【产品组成】
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Component
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GC231000554-1
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GC231000554-2
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5×Reaction Mix*1
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200 μl
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400 μl
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Supreme Enzyme Mix*2
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150 μl
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300 μl
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DEPC-treated Water
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1 ml
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2×1 ml
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*1: 包含Buffer、dNTPs、Random Hexamer Primer/Oligo (dT)20 Primer Mix。
*2: 包含ExonScript Reverse Transcriptase、Ribonuclease Inhibitor和dsDNase。
【第一链cDNA合成】
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在RNase-free离心管中配制如下混合液,轻轻混匀并瞬离以下成分:
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Component
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Volume
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10 pg-5 μg Total RNA or 10 pg-500 ng mRNA*3
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As Required
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DEPC-treated Water
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up to 13 μl
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5×Reaction Mix*4
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4 μl
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Supreme Enzyme Mix
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3 μl
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*1: 为保证逆转录成功,请使用高质量RNA模板。
*2: 5×Reaction Mix在使用前需充分混匀。
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按照下表所示进行逆转录反应:
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Temperature
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Time
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Note
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25℃
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10 min
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随机引物与RNA模板配对及去除基因组DNA
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55℃
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15 min
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逆转录反应及dsDNase快速灭活
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85℃
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5 min
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逆转录酶灭活
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产物可立即用于PCR或qPCR反应,或在-20℃保存,并在半年内使用;长期存放建议分装后在-70℃保存。cDNA应避免反复冻融。
【注意事项】
防止RNase污染请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用的离心管、枪头等耗材均需 保证RNase-free。