Genecarer RT SuperMix with dsDNase是将RNA逆转录成为cDNA更为简便的操作系统，含有第一链cDNA合成所需的所有试剂，只需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应。合成的第一链cDNA可广泛用于文库构建、第二链合成、杂交、PCR扩增、RT-qPCR检测等。试剂盒中包含新一代的逆转录酶和优化的缓冲液,与普通逆转录酶系统相比，具有逆转录能力强（合成较多全长cDNA）、无RNase H活性、热稳定性高和半衰期长等优点。该逆转录酶产物得率更高，获得的cDNA片段更长，模板使用范围更广等特点。5×Reaction Mix包含逆转录反应所需的缓冲液，dNTPs及优化的逆转录引物，Supreme Enzyme Mix包含ExonScript Reverse Transcriptase，Ribonuclease Inhibitor和dsDNase，以简化加样步骤。试剂盒中含有的新型dsDNase，能够特异性去除双链DNA，而不消化RNA样品、逆转录引物及合成的cDNA，并且具 有热敏感性，可在55℃快速不可逆失活，实现去除基因组污染与逆转录反应的同步进行。
【产品特点】
1.高热稳定性，反应温度42-55℃，有助于RNA二级结构打开；
2.逆转录能力强、cDNA合成得率高，片段更长；
3.无RNase H活性，避免第一链cDNA合成过程中DNA/RNA杂交体中模板RNA被降解，从而保证第一链cDNA合成量和长度；
4.去除基因组DNA，保证定量结果更加准确；
5.操作简便，仅需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应合成片段≤15 kb。
【适用范围】CDNA合成及文库构建、PCR扩增、RT-qPCR检测
【产品组成】
Component | GC231000554-1 | GC231000554-2 |
5×Reaction Mix*1 | 200 μl | 400 μl |
Supreme Enzyme Mix*2 | 150 μl | 300 μl |
DEPC-treated Water | 1 ml | 2×1 ml |
*1: 包含Buffer、dNTPs、Random Hexamer Primer/Oligo (dT)20 Primer Mix。
*2: 包含ExonScript Reverse Transcriptase、Ribonuclease Inhibitor和dsDNase。
【第一链cDNA合成】
在RNase-free离心管中配制如下混合液，轻轻混匀并瞬离以下成分：
Component | Volume |
10 pg-5 μg Total RNA or 10 pg-500 ng mRNA*3 | As Required |
DEPC-treated Water | up to 13 μl |
5×Reaction Mix*4 | 4 μl |
Supreme Enzyme Mix | 3 μl |
*1: 为保证逆转录成功，请使用高质量RNA模板。
*2: 5×Reaction Mix在使用前需充分混匀。
按照下表所示进行逆转录反应：
Temperature | Time | Note |
25℃ | 10 min | 随机引物与RNA模板配对及去除基因组DNA |
55℃ | 15 min | 逆转录反应及dsDNase快速灭活 |
85℃ | 5 min | 逆转录酶灭活 |
产物可立即用于PCR或qPCR反应，或在-20℃保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后在-70℃保存。cDNA应避免反复冻融。
【注意事项】
防止RNase污染请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需 保证RNase-free。
