GeneCarer 2×HiFi HotStart SuperMix-西安基恩科生物科技有限公司

产品描述

本产品包括通过基因改造技术实现快速扩增和超高保真的DNA聚合酶，延伸速度可达4 kb/min。同时含有dNTPs、Mg2 +、优化的反应缓冲液、PCR反应的稳定剂等，浓度为2×。由于使用的超高保真 DNA聚合酶具有极强的3’ →5’外切酶活性，与普通高保真酶相比，保真性更高，是普通Taq DNA Polymerase的100倍以上。DNA扩增时，只需加入模板、引物和水，使SuperMix溶液的浓度为1×即可进行反应。扩增产物为平端，可直接用于无缝克隆实验。

【产品特点】
减少PCR操作时间
避免因多步操作带来的污染
优化的缓冲液，可用于低丰度模板、复杂模板或富含GC/AT模板的扩增基因组DNA片段的扩增（≤ 15 kb）
Plasmid DNA片段的扩增（≤ 15 kb）热启动，高特异性
【适用范围】
超高保真PCR快速扩增，平端克隆，无缝克隆实验，基因定点突变
低丰度模板、复杂模板或富含GC/AT模板的扩增长片段扩增
【产品组成】

Component	GC231000559-1	GC231000559-2
2×AccuProof HiFi HotStart SuperMix (-dye)	1 mL	5×1 mL
6× DNA Loading Buﬀer	1 mL	2×1.5 mL

【推荐常规PCR体系（以50 μl反应体系为例）】

Component	Volume	Final Concentration
2×AccuProof HiFi HotStart SuperMixa	25 μL	1×
10 μM Forward Primer	2.5μL	0.5 μM
10 μM Reverse Primer	2.5 μL	0.5 μM
PCR-grade Water	As Required	-
Templateb	As Required	As Required
Total Volume	50 μL	-

使用时彻底融化、混匀。
不同模板最佳反应浓度有所不同，下表为50 μl体系推荐的模板用量：

模板种类	模板起始量
基因组 DNA	10 - 400 ng
质粒 DNA	10 pg - 5 ng
病毒 DNA	10 pg - 10 ng
CDNA	1 - 5 μL

【PCR条件】

Step	Temperature	Duration	Cycles
Initial Denaturation	98℃	30 sec	1
Denaturation	98℃	10 sec	25-35
Annealing	55-65℃	30 sec
Extension	72℃	15-30 sec/kb
Final Extension	72℃	5 min	1

【常见问题与解决方案】
1.无产物或产物量少

重复实验避免加样错误优化引物设计；
设置退火温度梯度，优化合适的退火温度使用高纯度模板并适当增加模板用量；
适当增加延伸时间；
增加循环数至35 - 40个循环增加Mg2+ 浓度至3 - 4 mM。

2.有非特异性扩增产物或弥散条带

设置退火温度梯度，优化合适的退火温度降低引物浓度至终浓度为0.2 μM；
优化引物设计；
适当减少延伸时间；
减少扩增循环数至25 - 30个循环；
使用高纯度模板并适当减少模板用量。