1. 探针板水化时间？
探针板放入37℃无CO2培养箱中水化过夜以得到最优结果。探针板最长水化时间是37℃水化72小时，但需要对水化板moat补水或放置湿盘。
2. 实验中为何必须设置背景校正孔？
背景校正孔被用来过滤掉实验的干扰因素，比如温度和bufferingcapacity，这些干扰因素会影响氧含量和pH变化（非来源于代谢变化的影响）。背景校正孔还能被用来修正整板间温度波动，来诊断潜在温度问题和判断实验中出现的数据异常情况，背景校正孔严禁有细胞加入。
3. 为何细胞培养板需要在37℃无CO2培养箱中放置45-60min？
细胞培养板在37℃无CO2培养箱中孵育45-60min的目的是为了脱气，释放CO2，脱气时间不能超过60min。
4. 悬浮细胞如何进行Seahorse检测 ？
悬浮细胞需要使用Cell Tak， poly-L-Lysine, fibronectin,Gelatin, poly-D-lysine等组织黏附剂处理细胞培养板，细胞培养板离心使细胞粘附，且不会影响测量结果。
5 .SeahorseXF检测液中需要加入抗生素吗？
一般无需加入抗生素，因为大部分Seahorse实验在几小时内就结束了。
6. 可以在seahorse检测液中加入血清吗？
不建议加入血清（胎牛血清或小牛血清），因为其会影响检测液的缓冲能力，血清成分可能与进行检测的药物/化合物发生非特异性结合而影响检测效果。另外，使用加入血清的检测液溶解药物加载至探针板加药孔中进行注射时，会出现注射失败的情况。
7. 为何不能使用basemedium配制的检测液进行Glycolyticrate与real-timeATP rate两个实验？
Base medium中含有酚红，该物质会影响这两个实验的测量。
8. ph对seahorse实验的影响大吗？
Seahorse 实验通过测定细胞代谢物（如：氧和质子）的变化来确定OCR和ECAR，而检测液pH会影响这些代谢的产生或消耗，因此保持检测液一致的pH（37℃，pH=7.4±0.5）非常重要。
9. 同一个样品重复差什么原因？
重复性比较差，一般情况是细胞接种不均匀引起的，建议45度斜角沿孔壁45°C孔壁缓慢加入细胞。
10. Seahorse实验结束后细胞还能继续使用吗？
可以用胰酶将细胞消化后继续使用，悬浮细胞因为有粘附剂胰酶消化时间可适当延长或过夜消化（如果需要继续使用细胞，可以在Seahorse检测液中加入抗生素）。