病毒服务
细胞服务
基因服务
质粒
病毒
细胞
试剂
SPLICSFAST-LDh-MT-P2A
产品基本信息
| 产品名称 | SPLICSFAST-LDh-MT-P2A（#214896） | ||
| 基因名称 | 无 | 物种 | 无 |
| 基因全称 | 无 | 基因转录本 | 无 |
| 基因别称 | 无 | 表达蛋白 | 无 |
| 基因ID | 无 | 转录本长度 | 无 |
| 拷贝数 | 高 | 筛选抗性 | Neo/G418 |
| 培养温度 | 37°C | 标签 | Myc |
| 原核抗性 | Amp+ | 荧光标记 | 动态荧光 |
骨架载体应用用途
SPLICSFAST-LDh-MT-P2A 采用 split-FAST的方法，将原本完整的荧光蛋白分割成两个没有活性的片段，一个较大的N片段（NFAST）和一个较小的C端片段（CFAST），通过P2A连接。LDh设计的为融合脂滴，MT设计为靶向线粒体外膜，当两个片段在空间上达到足够近的举例时，他们才能重新结合，形成有功能的完整荧光蛋白，这个重新结合的完整FAST蛋白本身并不发光，它需要结合一种特定的、可透过细胞膜的荧光配体（如HMBR）才能发出荧光。如添加HMBR配体，它可以使split-FAST系统发出明亮的绿色荧光。添加配体 HBR-3,5DOM，split-FAST系统则能够发出橙红色荧光。
质粒的核心用途是在活细胞内精确地可视化并动态研究脂滴与线粒体之间纳米尺度的膜接触位点。该系统的最终荧光信号并非固定颜色，而是可调的，通常在黄绿色至橙红色的范围内，具体取决于所添加的荧光配体。这使它成为了一个强大的“细胞器接触位点传感器”。脂滴是细胞储存中性脂质的“油库”，而线粒体是“发电厂”，负责通过脂肪酸氧化等过程“燃烧”脂质以产生能量。两者之间的物质和信号交换对于维持细胞的能量和脂质稳态至关重要。这些交换并非通过随机碰撞，而是在被称为膜接触位点的特化区域进行的，这些区域的空间距离非常短，通常在20纳米（nm）左右。这种尺度远低于普通光学显微镜的分辨率极限，因此传统成像方法难以直接观察。
1.载体构建出库标准是什么？
载体出库默认小提质粒出库，质粒量≥4ug，含甘油菌和穿刺菌。如需要无内毒素质粒提取质粒，我司可提供无内毒素质粒提取业务。
无内毒素质粒中提（A) | 质粒量≥35ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提(B) | 无内毒素中提出库是质粒量≥100ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提 | 无内毒素大提出库是质粒量≥500ug，浓度大于≥500ng/uL |
2.甘油菌保存方法？
甘油菌50%（v/v）=新鲜菌种：灭菌甘油制备而成，收到甘油菌可直接放-80保存1年
3.甘油菌的复苏方法？
从甘油冻存菌中复苏细菌，在无菌条件下，打开盖子，使用无菌接种环或灭菌枪头从冻存管中取适量冻存菌，划线接种到LB板（含有合适抗生素或无抗）上。操作应适当快一些，以减少冻存管内的融化。在合适的温度条件下，将划线接种的LB板进行过夜培养。过夜培养后，挑取单个克隆进行后续操作。
4.穿刺菌的保存方法？
穿刺菌为无菌枪头取新鲜菌液，然后接种形成穿刺菌，穿刺接种的细菌在温箱中孵育过夜，并在第二天上午检查其是否生长，确保制备的穿刺菌表面上能看到细菌后冰袋邮寄发货。穿刺菌4°C保存时间不超过30d，收到穿刺菌后须在2周内，在含有相应抗生素（抗性信息可在质粒图谱中查看）琼脂平板上划线培养出单菌落，挑取单个克隆进行后续操作。
5.无内毒素质粒提取菌液制备建议方法？
制备起始培养物制备：从甘油菌或者穿刺菌制备的单克隆菌落平板中，挑取新鲜的单克隆菌落，接种于2–5 mL含有相应选择性抗生素的LB培养基中，在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养约8小时（使用的试管或锥形瓶体积应至少为培养物体积的4倍）。
将起始培养物按1/500至1/1000的比例稀释到选择性LB培养基中。在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养12–16小时（使用的锥形瓶或容器体积应至少为培养物体积的4倍）后用商品化的无内毒素质粒试剂盒提取，提取的无内毒素质粒用于后续细胞转染或病毒包装等。
注意：无内毒素提取的质粒建议通过酶切鉴定和测序鉴定与原质粒无差异后进行后续实验。避免质粒提取或菌液接种过程所引起的菌液交叉污染。
9.测序结果原始文件用什么打开？
测序结果原始文件可以用 Snapgene 软件，DNAman分析软件等进行分析。
暂无相关论文。