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GC-Plenti-SFFV-GNRHR-Flag-P2A-Puro
过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | GC-Plenti-SFFV-GNRHR-Flag-P2A-Puro | ||
| 基因名称 | GNRHR | 物种 | 人（human) |
| 基因全称 | gonadotropin releasing hormone receptor | 基因转录本 | NM_000406.3 |
| 基因别称 | HH7; GRHR; LRHR; LHRHR; GNRHR1 | 表达蛋白 | NP_000397.1 |
| 基因ID | 2798 | 转录本长度 | 984bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
GNRHR（促性腺激素释放激素受体，Gonadotropin-Releasing Hormone Receptor）基因编码I型促性腺激素释放激素（GnRH）的受体蛋白，是下丘脑-垂体-性腺轴（HPG轴）中的核心调控元件。该基因定位于人类染色体4q13.2，包含3个外显子和2个内含子，全长约17-19 kb，编码一个属于G蛋白偶联受体（GPCR）家族的七次跨膜蛋白。GNRHR主要表达于垂体前叶促性腺激素细胞表面，亦在卵巢、睾丸、乳腺、前列腺、淋巴细胞等多种垂体外组织中检测到表达。当GnRH与GNRHR结合后，受体主要与Gq/11蛋白偶联，激活磷脂酰肌醇-钙离子第二信使系统，最终促进黄体生成素（LH）和卵泡刺激素（FSH）的合成与释放，从而调控性激素分泌与配子生成。GNRHR基因缺陷是先天性低促性腺激素性性腺功能减退症（CHH）的重要遗传病因之一，目前已鉴定出超过55种致病或可能致病变异。
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
| 1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
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