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GC-Plenti-SFFV-Hat1(Mouse)-Flag-P2A-Puro
过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | GC-Plenti-SFFV-Hat1(Mouse)-Flag-P2A-Puro | ||
| 基因名称 | Hat1 | 物种 | 小鼠（Mouse) |
| 基因全称 | histone aminotransferase 1 | 基因转录本 | NM_026115.4 |
| 基因别称 | KAT1; Hat-1; 2410071B14Rik | 表达蛋白 | NP_080391.2 |
| 基因ID | 107435 | 转录本长度 | 1248bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
Hat1（Histone aminotransferase 1）是小鼠基因组中编码 B 型组蛋白乙酰转移酶催化亚基的关键基因。位于 2 号染色体，编码区包含 11 个外显子，蛋白质的分子量约为 46-48 kDa。小鼠 Hat1 的核心催化活性是 乙酰化游离组蛋白 H4 的赖氨酸 5（H4K5）和赖氨酸 12（H4K12），形成 H4K5ac 和 H4K12ac 修饰 。此外，Hat1 对组蛋白 H2A 的赖氨酸 5（H2AK5）也表现出较弱的乙酰化活性，但 H4 是其首要生理底物 。该酶对底物的识别具有序列特异性：Hat1 倾向于修饰位于 GXGKXG 识别序列中的赖氨酸残基。这一序列特征恰好存在于 H4 的 N 端尾部（⁵G⁶K⁷G⁸G⁹K¹² 等）。小鼠 Hat1基因在 DNA 复制偶联的染色质组装过程中发挥核心作用。小鼠 Hat1 基因纯合敲除导致新生儿致死，表现为严重的肺发育缺陷、颅面畸形、成纤维细胞增殖障碍及基因组不稳定性。此外，Hat1 在精子发生过程中呈现阶段特异性表达模式，参与减数分裂启动、染色质重塑及精子遗传物质保护。
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
| 1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
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