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GC-Plenti-SFFV-PITPNB （human)-P2A-Puro
过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | GC-Plenti-SFFV-PITPNB （human)-P2A-Puro | ||
| 基因名称 | PITPNB | 物种 | 人（Human) |
| 基因全称 | phosphatidylinositol transfer protein beta | 基因转录本 | NM_012399.5 |
| 基因别称 | VIB1B, PtdInsTP, PI-TP-beta | 表达蛋白 | NP_036531.1 |
| 基因ID | 23760 | 转录本长度 | 813bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
PITPNB（phosphatidylinositol transfer protein beta）基因编码 I 类磷脂酰肌醇转移蛋白家族成员，位于人类 22 号染色体 q12.1 区域,包含 12 个外显子，其中编码区跨越 11 个外显子,基因的 5‘ 非翻译区（5’ UTR）较短（约 65 个碱基），而 3‘ 非翻译区（3’ UTR）较长（约 2033 个碱基），提示该基因的表达可能受到 microRNA 等转录后调控机制的显著影响。已有研究证实，miR-1185-5p 可与 PITPNB 的 3‘ UTR 特异性结合，从而抑制其表达,主要转录本NP_036531.1编码的蛋白质由 271 个氨基酸 组成，分子量约 31.5 kDa。该基因编码的蛋白质是一种胞质可溶性脂质转移蛋白，能够在细胞内膜系统之间催化磷脂酰肌醇（PI）和磷脂酰胆碱（PC）的交换与转运，这一活性是 COPI 复合物介导的高尔基体至内质网逆向囊泡运输所必需的，COPI 囊泡负责将逃逸的内质网驻留蛋白从高尔基体回收至 ER，维持 ER 的蛋白质组稳态。PITPNB 在多种组织中广泛表达，其功能异常与神经发育障碍及多种肿瘤的发生发展相关，比如PITPNB 在 头颈鳞状细胞癌（HNSCC） 组织中 高表达，在鼻咽癌 CNE-2 细胞中，过表达 PITPNB 可显著 促进细胞增殖和细胞迁移。环状 RNA PITPNB（circRNA PITPNB）已被提出作为原发性肝细胞癌的分子标志物 。
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
| 1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
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