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GC-Plenti-SFFV-DNAJC3（human)-Flag-P2A-Puro
过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | GC-Plenti-SFFV-DNAJC3（human)-Flag-P2A-Puro | ||
| 基因名称 | DNAJC3 | 物种 | 人（Human) |
| 基因全称 | DnaJ heat shock protein family (Hsp40) member C3 | 基因转录本 | NM_006260.5 |
| 基因别称 | P58; HP58; ACPHD; ERdj6; PRKRI; | 表达蛋白 | NP_006251.1 |
| 基因ID | 5611 | 转录本长度 | 1512bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
DNAJC3（DnaJ heat shock protein family member C3）基因编码一种内质网（ER）驻留的 Hsp40 家族共伴侣蛋白，也被称为 P58^IPK、ERdj6 或 p58。该基因位于人类 13 号染色体 q32.1 区域，包含 12 个外显子，其编码的蛋白质同时含有高度保守的 J 结构域和九个四肽重复（TPR）基序，在未折叠蛋白反应（UPR）中发挥关键调控作用，主要定位于内质网，具体包括ER腔和粗面内质网。DNAJC3 作为 BiP（HSPA5）的共伴侣，通过抑制 PERK、PKR 和 GCN2 等 eIF2α 激酶的活性，在 ER 应激期间调节蛋白质翻译的暂停与恢复。DNAJC3 的双等位基因功能缺失突变导致一种常染色体隐性遗传的多系统疾病——小脑与周围神经联合性共济失调伴听力丧失和糖尿病（ACPHD），该病以青少年起病糖尿病、神经退行性变、感音神经性耳聋、身材矮小和甲状腺功能减退为特征
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
| 1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
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