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GC-Plenti-SFFV-FOXM1-Flag-P2A-puro
过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | GC-Plenti-SFFV-FOXM1-Flag-P2A-puro | ||
| 基因名称 | FOXM1 | 物种 | 人（Human) |
| 基因全称 | forkhead box M1 | 基因转录本 | NM_021953.4 |
| 基因别称 | MPP2, HFH11, HNF-3, INS-1, MPP-2, PIG29, | 表达蛋白 | NP_068772.2 |
| 基因ID | 2305 | 转录本长度 | 2289bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
FOXM1（Forkhead Box M1）基因编码叉头框转录因子家族成员，位于人类12号染色体p13.33区域，包含 10个外显子，主要由三个功能区域，N端抑制结构域（NRD，N-terminal Repressor Domain）位于蛋白质N端，是一个负调控结构域，通过自抑制机制抑制FOXM1的转录激活活性，是细胞周期进程和增殖的核心调控因子；叉头框结构域（FKH，Forkhead/winged-helix domain）位于蛋白质中央，是高度保守的 DNA结合结构域（DBD），以“翼状螺旋”（winged helix）为特征，属于FH（Forkhead）家族；C端酸性转录激活结构域（TAD，Transactivation Domain）位于C端，包含多个 Cyclin-Cdk依赖的磷酸化位点，是FOXM1转录激活功能的核心区域。该基因通过可变剪接产生多个蛋白质异构体，其中FOXM1B和FOXM1C具有转录激活活性，是其主要的功能形式。FOXM1特异性表达于增殖细胞，在G1/S和G2/M转换中发挥关键作用，调控众多细胞周期相关基因的表达。作为典型的“癌胚转录因子”，FOXM1在多种人类实体瘤中频繁上调，其高表达与肿瘤发生、进展、转移及化疗耐药密切相关。全癌种分析表明，FOXM1过表达与基因扩增、p53失活和Rb-E2F通路失调显著相关。
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
| 1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
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