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GC-Plenti-SFFV-CD274（mouse)-Flag-P2A-Puro
过表达慢病毒产品信息
| 产品名称 | GC-Plenti-SFFV-CD274（mouse)-Flag-P2A-Puro | ||
| 基因名称 | CD274 | 物种 | 小鼠（Mouse) |
| 基因全称 | CD274 molecule | 基因转录本 | NM_021953.4 |
| 基因别称 | B7-H; B7H1; PDL1; PD-L1; ADMIO5; hPD-L1; | 表达蛋白 | NP_054862.1 |
| 基因ID | 29126 | 转录本长度 | 870bp |
| 荧光表达 | 无 | 筛选标记 | Puro |
基因基本信息
Cd274（CD274 antigen）基因编码程序性死亡配体1（PD-L1），是B7家族免疫检查点分子的核心成员。该基因位于小鼠19号染色体C1带，8个外显子，其编码的I型跨膜糖蛋白主要包括1. 胞外IgV样结构域：包含互补决定区样（CDR-like）序列，构成与PD-1的结合界面。该相互作用在结构上类似于抗原与抗体及TCR的结合；2. 胞外IgC样结构域：位于IgV结构域近膜侧，属于免疫球蛋白C样折叠。疏水性跨膜结构域：将蛋白质锚定在细胞膜上；3. 胞内结构域（ICD）：与其他B7家族成员的胞内区序列相似性较低，但在反向信号传导和分子稳定性维持中发挥关键作用，通过免疫球蛋白V样和C样结构域与受体PD-1结合，在维持免疫稳态和肿瘤免疫逃逸中发挥双重作用。Cd274在造血和非造血细胞中广泛表达，其表达受IFN-γ等炎性细胞因子的诱导调控。Cd274基因敲除小鼠表现出多种免疫相关表型，包括同种异体胎儿存活率下降和实验性自身免疫性脑脊髓炎加重。作为PD-1/PD-L1免疫检查点通路的配体端，Cd274是当前肿瘤免疫治疗的核心靶点，针对该基因的遗传敲除和条件性敲除模型已成为解析肿瘤微环境中PD-L1功能来源的关键工具。
慢病毒感染快速指南
1.将目的细胞按30%汇合度接种到24孔板，约3-5×104细胞数/孔，不同细胞因为细胞大小不同细胞数量会不同，快速指南以细胞数量为5×104为例，加入500uL完全培养基进行细胞培养。
2.接种后12-20h感染阴性对照慢病毒（接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长，否则细胞增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选）。
3. 加病毒量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量见下表。同时加入Polybrene，每孔加0.25uL，浓度为10mg/mL Polybrene，细胞培养液中终浓度为5ug/mL。
病毒液滴度（TU/mL） | MOI=10（uL） | MOI=20（uL） | MOI=40（uL） | MOI=80（uL） | MOI=100（uL） |
| 1×108TU/mL | 5uL | 10uL | 20uL | 40uL | 60ul |
4.感染16-20h后更换培养基，弃去培养基，每孔加入500uL新鲜的培养基。
5. 感染后48-96h显微镜观察荧光。（注：如果48h-96h期间细胞汇合度达到100%，请及时传代培养）。
6. 建议将48孔板细胞进行传代，传代12孔板，后继续观察荧光，根据细胞状态和荧光细胞比例综合判断细胞感染最佳MOI值。一般选择细胞生长良好，感染效率80%左右的感染条件作为最佳感染条件。（注：100%荧光感染不是细胞最佳MOI值，因为可能会造成细胞慢病毒感染拷贝数太高，影响细胞正常生长状态）。
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