细胞别称 | MLE-12
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细胞来源 | 肺；上皮细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
细胞类型 | 转化细胞系 |
生长特性 | 贴壁细胞 |
安全等级 | BSL2 |
包装规格 | T25 瓶或者 1mL 冻存管包装 |
倍增时间 | 2~3 天 |
传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
保藏机构 | ATCC |
【培养保存】
培养体系：DMEM/F12+10%FBS+1%PS
培养条件：气相:空气,95%;CO2,5%;温度:37℃
冻存条件：基础培养基+10%DMSO+20%FBS，液氮保存
【传代步骤】
当细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次；
2. 加 1ml 消化液于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 2-4 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加胰酶 3 倍体积的培养基终止消化；
3. 用巴氏管轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，加入培养液后吹匀；
4. 收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按 1：2 的比例分到新的含 6ml 培养基的新皿中或者瓶中，建议存一支备用，后续传代根据实际情况按 1:2 到 1:4 的比例进行。
【冻存步骤】
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 3ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数；
2. 5min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀， DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于 1x10(6)/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识；
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，至少 2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
