293T （人胚肾细胞）

【培养保存】
培养体系：DMEM+10%FBS+1%PS
培养条件：气相:空气,95%;CO2,5%;温度:37℃
冻存条件：基础培养基+10%DMSO+20%FBS，液氮保存
【传代步骤】
当细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
(1).弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；
(2).加1ml消化液于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化2-4分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加胰酶3倍体积的培养基终止消化；
(3).用巴氏管轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入培养液后吹匀；
(4).收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。
【冻存步骤】
（1）.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入3ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数；
（2）.5min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x10(6)/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识；
（3）.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。