NK-92细胞是一种白细胞介素-2 (IL-2) 依赖性自然杀伤细胞系, 1992年建立于一名患有快速进展性非霍奇金淋巴瘤的 50 岁白人男性的外周血单核细胞。NK-92细胞对很多恶性细胞有细胞毒性;铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞(经过照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的体外免疫清扫而不危及血细胞的功能。NK-92细胞有以下特征:CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性;CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。
| 细胞别称 | NK92; Natural Killer-92; NK-92.05; Neukoplast; aNK |
| 细胞来源 | NK细胞;淋巴瘤/白血病;男性;50岁 |
| 细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
| 细胞类型 | 肿瘤细胞 |
| 生长特性 | 悬浮细胞 |
| 安全等级 | BSL2 |
| 包装规格 | T25瓶或者1mL冻存管包装 |
| 倍增时间 | 2~3天 |
| 传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
| 保藏机构 | ATCC; CRL-2407;CCTCC; GDC0052;DSMZ; ACC-488 |
【培养保存】
培养体系:α-MEM+10%FBS+1%PS
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%;温度:37℃
冻存条件:基础培养基+10%DMSO+20%FBS,液氮保存
【传代步骤】
当细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
(1).弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次;
(2).加1ml消化液于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化2-4分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加胰酶3倍体积的培养基终止消化;
(3).用巴氏管轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,加入培养液后吹匀;
(4).收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中,建议冻存一支备用,后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。
【冻存步骤】
(1).细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入3ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数;
(2).5min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x10(6)/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识;
(3).将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取