K562 (人慢性髓原白血病细胞) 是由Lozzio从一位临终的53岁女性慢性骨髓性白血病患者的胸水中建立。K-562细胞被归入高度未分化的粒性白细胞类,Erson等对其表面膜性质的研究表明,K-562细胞是一株人类红白血病细胞。K-562细胞在自然杀伤分析中广泛作为高敏感的体外受体,See Pross等将K-562细胞用于NK细胞的体外详细检测,包括NK细胞活性的数学量化。K-562母细胞是多能性造血恶性细胞,它能自发分化成可识别的红血球祖细胞、粒性白细胞、单核细胞等。K-562细胞是EBNA阴性的。
| 细胞别称 | K562; K 562; GM05372 |
| 细胞来源 | 骨髓;慢性骨髓性白血病(CML) |
| 细胞形态 | 淋巴细胞样 |
| 细胞类型 | 肿瘤细胞 |
| 生长特性 | 悬浮细胞 |
| 安全等级 | BSL1 |
| 包装规格 | T25瓶或者1mL冻存管包装 |
| 倍增时间 | 2~3天 |
| 传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
| 保藏机构 | ATCC; CCL-243 BCRC; 60007 BCRJ; 0126 CCLV; CCLV-RIE 0439 DSMZ; ACC-10 ECACC; 89121407 |
【培养保存】
培养体系:RPMI-1640+10%FBS+1%PS
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%;温度:37℃
冻存条件:基础培养基+10%DMSO+20%FBS,液氮保存
【传代步骤】
当细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
(1).弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次;
(2).加1ml消化液于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化2-4分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加胰酶3倍体积的培养基终止消化;
(3).用巴氏管轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,加入培养液后吹匀;
(4).收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中,建议冻存一支备用,后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。
【冻存步骤】
(1).细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入3ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数;
(2).5min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x10(6)/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识;
(3).将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。